产品货号：
WH0121
中文名称：
动物组织DNA提取试剂盒(磁珠法)
英文名称：
Magnetic Animal Tissue Genomic DNA Extraction Kit
产品规格：
50次|200次|1000次
发货周期：
1～3天
产品价格：
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本试剂盒采用具有独特分离作用的磁珠和独特的缓冲液系统，从动物组织样品中分离纯化高质量基因组DNA。独特包埋的磁珠，在一定条件下对核酸具有很强的亲和力，而当条件改变时，磁珠释放吸附的核酸，能够达到快速分离纯化核酸的目的。整个过程不涉及有机试剂，安全、便捷，提取的基因组DNA片段大，纯度高，质量稳定可靠，尤其适合高通量工作站的自动化提取。使用本试剂盒纯化的DNA可适用于各种常规操作，包括酶切、PCR、荧光定量PCR、文库构建、Southern杂交、芯片检测和高通量测序等实验。
使用本试剂盒按说明书操作对大鼠不同组织、鱼、虾、贝、培养细胞和鸭腿肉等样本进行DNA纯化，洗脱体积为150μL，琼脂糖凝胶电泳上样量范围为1～2μL。提取结果证明本试剂盒具有广泛的样品适用性，尤其对鼠尾、鱼、虾、贝等较难处理的样本效果更佳。
保存：室温（15～25℃）干燥条件下，可保存12个月，更长时间的保存可置于2～8℃。2～8℃保存条件下，若溶液产生沉淀，使用前应将试剂盒内的溶液在室温放置一段时间，必要时可在37℃水浴中孵育10min，以溶解沉淀。
使用前请先在缓冲液GDA和漂洗液PWD中加入无水乙醇，加入体积请参照瓶子上的标签。
一、手工操作步骤
二、移液法自动化仪器提取步骤
三、磁棒法自动化仪器提取步骤
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- 简便快捷：直接裂解，无需孵育时间，1h内即可获得超纯的基因组DNA；
- 高通量：可整合移液法自动化仪器和磁棒法自动化仪器进行高通量提取实验；
- 安全无毒：无需酚/氯仿等有机试剂；
- 纯度高：获得的DNA纯度高，可直接用于芯片检测、高通量测序等实验。
| 样本 | 最适样本量 | DNA得率 | |
| 鼠 | 脑 | 25mg | 20～30μg |
| 心脏 | 25mg | 20～30μg | |
| 肝脏 | 25mg | 30～50μg | |
| 脾脏 | 25mg | 50～70μg | |
| 肺 | 25mg | 50～70μg | |
| 肾脏 | 25mg | 30～50μg | |
| 尾 | 大鼠0.3cm | 50～80μg | |
| 小鼠0.6cm | 50～80μg | ||
| 其他组织类型 | 肌肉组织 | 50mg | 5～10μg |
| 鱼 | 50mg | 5～10μg | |
| 虾 | 50mg | 5～10μg | |
| 贝 | 30mg | 30～50μg | |
| 微量样本 | 口腔拭子 | 1个 | 0.2～1μg |
| 干血斑 | 3片3×3mm | 0.2～1μg | |
使用本试剂盒按说明书操作对大鼠不同组织、鱼、虾、贝、培养细胞和鸭腿肉等样本进行DNA纯化，洗脱体积为150μL，琼脂糖凝胶电泳上样量范围为1～2μL。提取结果证明本试剂盒具有广泛的样品适用性，尤其对鼠尾、鱼、虾、贝等较难处理的样本效果更佳。
| 组分 | 50次 | 200次 | 1000次 |
| 组织消化液GHA | 12mL | 50mL | 5×50mL |
| 缓冲液GHB | 20mL | 80mL | 5×80mL |
| 缓冲液GDA | 25mL | 90mL | 5×90mL |
| 漂洗液PWD | 20mL | 2×40mL | 5×2×40mL |
| Proteinase K | 1mL | 4×1mL | 5×4×1mL |
| 磁珠悬浮液G | 2×1mL | 6×1mL | 5×6×1mL |
| 洗脱缓冲液TB | 15mL | 60mL | 5×60mL |
保存：室温（15～25℃）干燥条件下，可保存12个月，更长时间的保存可置于2～8℃。2～8℃保存条件下，若溶液产生沉淀，使用前应将试剂盒内的溶液在室温放置一段时间，必要时可在37℃水浴中孵育10min，以溶解沉淀。
- 本产品适用于手工提取或自动化仪器整合。
- 自备试剂：异丙醇，乙醇。
- 样品应避免反复冻融，否则会导致提取的DNA片段较小且提取量也下降。
- 若裂解液GHB中有沉淀，可在37℃水浴中重新溶解，摇匀后使用。
- 如需去除RNA残留，需自备RNase A溶液（100mg/mL，货号：WH0217）。
使用前请先在缓冲液GDA和漂洗液PWD中加入无水乙醇，加入体积请参照瓶子上的标签。
一、手工操作步骤
- 取动物组织10～50mg，尽量剪成小块，加入200μL组织消化液GHA和20μL Proteinase K，使用电动匀浆机研磨约10 s至组织研磨充分。
① 匀浆后仍有肉眼可见的组织块的样本，建议65℃消化30min至消化完全；
② 对于匀浆充分的样本，可以省去65℃消化的步骤；
③ 对于鼠尾样本，建议于56℃消化过夜；
注意：样本消化完成后，如果有组织碎片，建议12000rpm离心1min去除残留杂质。
注意：如果需要去除RNA，加入4μL RNase A室温放置10min （货号：WH0217，自备) - 加入300μL裂解液GHB，振荡混匀。
- 将离心管置于75℃，孵育15min，期间颠倒混匀3回，每回3～5次。
- 室温放置5min。
- 加入350μL异丙醇，振荡混匀10sec。
- 加入30μL磁珠悬浮液G，振荡混匀1min，共静置9min，每3min振荡混匀1min。
注意：为了确保磁珠彻底重悬，请在使用前振荡混匀。
对于口腔拭子和干血斑等基因组DNA含量少的样本，建议使用15μL的磁珠；
对于肌肉组织等基因组DNA含量中等的样本，建议使用20μL的磁珠；
对于鼠的脾脏等基因组DNA含量高的样本，建议使用30μL的磁珠。 - 将离心管放置于磁力架上静置30sec，磁珠完全吸附后，小心吸去液体。
- 加入700μL缓冲液GDA（使用前请先检查是否已加入无水乙醇），振荡混匀30sec。
- 将离心管放置于磁力架上静置30sec，磁珠完全吸附后，小心吸去液体。
注意：如果对于DNA纯度要求更高，可以重复步骤8和9一次。 - 加入700μL漂洗液PWD（使用前请先检查是否已加入无水乙醇），振荡混匀30sec。
- 将离心管放置于磁力架上静置30sec，磁珠完全吸附后，小心吸去液体。
- 重复步骤10和11一次。
- 将离心管于磁力架上，室温晾干10～15min。
注意：乙醇残留会抑制后续的酶反应，所以晾干时要确保乙醇挥发干净。但也不要干燥太长时间，以免难以洗脱DNA。 - 将离心管从磁力架上取下，加入100～200μL洗脱缓冲液TB，振荡混匀，置于56℃，孵育10min，期间颠倒混匀3回，每回3～5次。
- 将离心管放置于磁力架上静置2min，磁珠完全吸附后，小心将DNA溶液转移至一个新离心管中，并于适当条件保存。
二、移液法自动化仪器提取步骤
- 准备工作及注意事项：
- 本产品可整合Hamilton Microlab STAR、Beckman Coulter Biomek?FX等移液法自动化仪器进行高通量基因组提取工作。
- 组织样本的处理：同手工法样本处理，消化完成后转入96孔深孔板内。
- 磁珠稀释液的配制：按照30μL磁珠悬浮液G加入70μL异丙醇的比例混合，混合后每个样本用量为100μL。
- 对于Hamilton Microlab STAR类的仪器，有放置2mL离心管的板位，可以不使用异丙醇来稀释磁珠，异丙醇的加入体积仍为350μL。每个离心管可以放入1mL左右的磁珠，吸取磁珠前吹打混匀5次，直接进行30μL磁珠的分液操作，分液完成后将磁珠管盖盖好保存。
- 对于动物脾脏、肝脏和肾脏等DNA含量丰富的样本，建议裂解后加入异丙醇吹打混匀5次以后，再加入磁珠进行混匀，避免磁珠聚集后不易进行充分的漂洗。
- 考虑仪器设定温度和96孔板内的实际温度有一定的偏差，在裂解和洗脱时建议仪器设定温度比实际使用温度高出10℃。
- 本产品可整合Hamilton Microlab STAR、Beckman Coulter Biomek?FX等移液法自动化仪器进行高通量基因组提取工作。
- 提取步骤：
- 在96深孔板（自备)中加入200μL处理好的组织样本。
- 每孔加入300μL裂解液GHB，吹吸6次。
- 将深孔板置于75℃，孵育15min，振荡混匀。
- 将加热模块温度调至25℃，继续振荡5min。
- 每孔加入270μL的异丙醇，吹吸6次，然后振荡混匀5min。
- 每孔加入100μL磁珠稀释液，吹吸6次，然后振荡混匀10min。
- 将深孔板放置于磁力架上静置2min，磁珠完全吸附后，吸去液体。
- 将深孔板从磁力架上取下，加入100μL缓冲液GDA，振荡混匀2min。然后再加入600μL缓冲液GDA，吹吸6次，然后振荡混匀2min。
- 将深孔板放置于磁力架上静置30sec，磁珠完全吸附后，吸去液体。
注意：如果对于DNA纯度要求更高，可以重复步骤8和9一次。 - 将深孔板从磁力架上取下，加入100μL漂洗液PWD，振荡混匀1min。然后加入600μL漂洗液PWD，吹吸6次，然后振荡混匀2min。
- 将深孔板放置于磁力架上静置30sec，磁珠完全吸附后，吸去液体。
- 重复步骤10和11一次。
- 将深孔板置于磁力架上，37℃晾干5min。
- 将深孔板从磁力架上取下，加入100～200μL洗脱缓冲液TB，置于65℃，振荡混匀10min。
- 将深孔板放置于磁力架上静置2min，磁珠完全吸附后，小心将DNA溶液转移至收集板中，并于适当条件保存。
- 在96深孔板（自备)中加入200μL处理好的组织样本。
三、磁棒法自动化仪器提取步骤
- 准备工作及注意事项：
- 本产品在Thermo KingFisher Flex等自动化仪器上整合成功。
- 组织样本的处理：同手工法样本处理，消化完成后转入96孔深孔板内。
- 将300μL缓冲液GHB、700μL缓冲液GDA、700μL漂洗液PWD和100～200μL洗脱缓冲液TB分别加到96孔板相应的位置上，将30μL磁珠G加入到700μL缓冲液GDA中。
- 使用磁棒法仪器也可以按照移液法仪器的操作步骤，需要裂解步骤完成后，设置暂停步骤再加入异丙醇。
- 本产品在Thermo KingFisher Flex等自动化仪器上整合成功。
- 提取步骤：
- 将处理好的组织样本加入到含有裂解液GHB的96孔样品板里。
- 将96孔板置于自动化提取仪中，75℃孵育15min，期间中速和快速间隔拍打混匀。
- 仪器暂停后，每孔加入350μL异丙醇，快速拍打混匀5min。
- 使用磁力套深入到含有磁珠的缓冲液GDA的孔中，快速拍打混匀1min，吹散磁珠。
- 磁力棒深入到磁力套中，吸附磁珠3次，每次20sec。
- 将磁珠转移到含有组织消化液和裂解液GHB的孔中，释放磁珠，中速和快速间隔拍打混匀10min。
- 磁力棒深入到磁力套中，吸附磁珠3次，每次20sec。
- 将磁珠转移到含有第一遍缓冲液GDA的孔中，释放磁珠，快速拍打混匀3min。
- 磁力棒深入到磁力套中，吸附磁珠3次，每次20sec。
- 将磁珠转移到含有第二遍缓冲液GDA的孔中，释放磁珠，快速拍打混匀3min。
- 磁力棒深入到磁力套中，吸附磁珠3次，每次20sec。
- 将磁珠转移到含有第一遍漂洗液PWD的孔中，释放磁珠，快速拍打混匀3min。
- 磁力棒深入到磁力套中，吸附磁珠3次，每次20sec。
- 将磁珠转移到含有第二遍漂洗液PWD的孔中，释放磁珠，快速拍打混匀3min。
- 磁力棒深入到磁力套中，吸附磁珠3次，每次20sec。
- 磁力棒吸附磁珠后悬空晾干5min。
- 将磁珠转移到含有洗脱缓冲液TB的孔中，75℃孵育，快速拍打混匀10min。
- 磁力棒深入到磁力套中，吸附磁珠3次，每次30sec。
- 将吸附的废弃磁珠转移到含有漂洗液PWD的孔中，拍打混匀1min。
- 程序结束后，小心将DNA溶液转移至收集板，并于适当条件保存。
- 将处理好的组织样本加入到含有裂解液GHB的96孔样品板里。
- 得到的基因组DNA片段的大小与样品保存时间、操作过程中的剪切力等因素有关。得到的DNA片段可用琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计检测浓度与纯度。
- DNA应在OD260处有显著吸收峰，OD260值为1相当于大约50μg/ml双链DNA、40μg/ml单链DNA。
- OD260/OD280比值应为1.7～1.9，如果洗脱时不使用洗脱缓冲液，而使用去离子水，比值会偏低，因为pH值和离子存在会影响光吸收值，但并不表示纯度低。
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